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ELISA原理:酶聯免疫吸附測定原理與應用方向2016-11-24

酶聯免疫吸附測定簡介

酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay),簡稱ELISA,是實驗室最常用的檢測方法。 酶是能夠催化化學反應的特殊蛋白質,其催化效力超過目前所有人造催化劑。ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后,既不影響抗原抗體反應的特異性,也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存等優點,適合于大批標本的檢測,廣泛應用于食品安全檢測、醫療檢測以及免疫實驗分析等領域。

酶聯免疫吸附測定原理

ELISA必須遵守以下3個核心原理:1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其免疫學活性;2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,可根據已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關鍵的作用,常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應,還能催化酶促反應,顯示出生物放大作用。

酶聯免疫吸附測定應用方向

ELISA應用的范圍很廣,而且正在不斷地擴大,原則上ELISA可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。在實際應用方面可用于疾病的臨床診斷、疾病監察、疾病普查、法醫檢查、獸醫及農業上的植物病害的診斷檢定等。因此,它和生物化學、免疫學、微生物學、藥理學、流行病學及傳染病學等方面密切相關。按照待測物性質的不同,ELISA反應可以分為抗原檢測反應及抗體檢測反應。

在醫學領域上,能夠進行檢測的抗原包括:內分泌方面的雌性激素、絨毛膜促性腺激素、黃體素、胰島素、皮質醇、促甲狀腺素和孕酮等,血液學方面的凝固因子(如第Ⅷ凝固因子)、紅細胞抗原及結合球蛋白(Hapto Globin)等,腫瘤方面已試用檢查甲胎蛋白(AFP)癌胚抗原(CEA),此外還有霍亂弧菌、大腸肝菌、綠膿桿菌和破傷風梭菌毒素;腦膜炎球菌及淋球菌抗原;檢測免疫抑制病人中常見的白色念殊菌抗原,檢測病人或病獸的糞便中的輪狀病毒;檢測甲肝病毒、皰疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨細胞病毒等。

而用ELISA檢測抗體,已獲得對多種傳染病和寄生蟲病的血清學診斷,亦開始廣泛用于現場流行病學調查。在寄生蟲病方面,它用于對瘧原蟲、阿米巴、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學診斷,這對人醫和獸醫都很重要。在病原微生物方面已用于檢測鏈球菌、沙門氏菌、布氏桿菌、結核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體,還可用于破傷風抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測定以及檢測斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體作診斷,也可用于對立克次氏體的種屬鑒別,還有用于檢測鸚鵡熱衣原體抗體的報導。ELISA也可應用于以下病毒抗體檢測:流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質炎病毒等,其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外,還可用于鑒定病毒型別,例如皰疹病毒。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測定以及對過敏的診斷,例如檢測各種過敏原的抗體、DNA抗體及甲狀腺球蛋白抗體,紅斑性痕瘡抗體等等。在衛生學方面,可用于檢測食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。



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